上海東寰與您分享免疫沉淀技術
免疫沉淀技術是一種研究蛋白質間交互作用的生物技術，這種技術是將蛋白質視為抗原，并利用抗體與之進行特異性結合的特性，來進行研究。這項技術可用來將含有上千種不同蛋白質的樣品中，分離和濃縮出特定蛋白質。進行免疫沉淀法時，抗體需要和一個受質結合，下面就由上海東寰給大家簡要介紹。
免疫沉淀技術是一種研究蛋白質間交互作用的生物技術，這種技術是將蛋白質視為抗原，并利用抗體與之進行特異性結合的特性，來進行研究。這項技術可用來將含有上千種不同蛋白質的樣品中，分離和濃縮出特定蛋白質。進行免疫沉淀法時，抗體需要和一個受質結合，下面就由上海東寰給大家簡要介紹。
RIP 實驗基本原理：
1. 用抗體或表位標記物捕獲細胞核內或細胞質中內源性的RNA結合蛋白；
2. 防止非特異性的RNA的結合；
3. 免疫沉淀把RNA結合蛋白及其結合的RNA一起分離出來；
4.結合的RNA序列通過microarray（RIP-Chip），定量RT-PCR或高通量測序（RIP-Seq）方法來鑒定。
免疫沉淀是基于傳統(tǒng)親和純化方法開發(fā)的，在含有目的抗原的細胞裂解液中加入特定的抗體以及Protein A-Beads （預先將Protein A固定結合在磁珠上），根據(jù)抗原與抗體、ProteinA與抗體的FC的特異性，形成“抗原-抗體-ProteinA-Beads”復合物，清洗離心后去除溶液中未結合的雜蛋白，檢測是否存在目的蛋白。與傳統(tǒng)的柱式親和純化相比，免疫沉淀的目標是只分離足夠用于Western Blot或其他檢測方法檢測的蛋白質。通?？梢詫⒁烟幚砗臀刺幚淼臉悠愤M行比較，從而評估目標蛋白的相對量。
在免疫沉淀實驗中，用于檢測的抗體可以是預固定的，或者是游離的。通常，預固定抗體法更適用于IP，但是，當目標蛋白濃度較低、抗體與抗原的結合親和力較弱的情況下，可以使用游離的抗體形成免疫復合物，效果會比較好。
以上就是上海東寰關于免疫沉淀技術的分享，希望能給大家提供到幫助，了解更多關于免疫沉淀技術的問題歡迎來電咨詢。
RIP 實驗基本原理：
1. 用抗體或表位標記物捕獲細胞核內或細胞質中內源性的RNA結合蛋白；
2. 防止非特異性的RNA的結合；
3. 免疫沉淀把RNA結合蛋白及其結合的RNA一起分離出來；
4.結合的RNA序列通過microarray（RIP-Chip），定量RT-PCR或高通量測序（RIP-Seq）方法來鑒定。
免疫沉淀是基于傳統(tǒng)親和純化方法開發(fā)的，在含有目的抗原的細胞裂解液中加入特定的抗體以及Protein A-Beads （預先將Protein A固定結合在磁珠上），根據(jù)抗原與抗體、ProteinA與抗體的FC的特異性，形成“抗原-抗體-ProteinA-Beads”復合物，清洗離心后去除溶液中未結合的雜蛋白，檢測是否存在目的蛋白。與傳統(tǒng)的柱式親和純化相比，免疫沉淀的目標是只分離足夠用于Western Blot或其他檢測方法檢測的蛋白質。通?？梢詫⒁烟幚砗臀刺幚淼臉悠愤M行比較，從而評估目標蛋白的相對量。
在免疫沉淀實驗中，用于檢測的抗體可以是預固定的，或者是游離的。通常，預固定抗體法更適用于IP，但是，當目標蛋白濃度較低、抗體與抗原的結合親和力較弱的情況下，可以使用游離的抗體形成免疫復合物，效果會比較好。
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